葡萄糖氧化酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書微量法

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

貨號(hào)：4531

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 3mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 1mL×1 支，-20℃保存，融化后可分裝保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：

GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動(dòng)物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產(chǎn)生 H₂O₂， 是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。

GOD 催化葡萄糖產(chǎn)生 H₂O₂，過(guò)氧化物酶在有氧存在時(shí)催化 H₂O₂ 分解產(chǎn)生的氧又將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關(guān)系。

試驗(yàn)中所需的儀器和設(shè)備：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟：

一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備

1、組織處理：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清， 置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）：直接檢測(cè)。二、測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 500nm，蒸餾水調(diào)零。

2、GOD 工作液的配制：取 15mL 試劑一加 3mL 試劑二混勻，調(diào) PH 至 5.1（現(xiàn)配現(xiàn)用）。

3、加樣表：

樣品測(cè)定前將 GOD 工作液與試劑三放入 37℃水浴中保溫，然后將上述試劑按順序加入微量比色皿/96 孔板中，加樣本的同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)；在 500 nm 波長(zhǎng)下記錄 20 秒時(shí)的初始吸光度 A1 及 1 分20 秒時(shí)的吸光度 A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。

三、GOD 活力單位的計(jì)算

a. 用微量玻璃比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、動(dòng)物組織 GOD 活力的計(jì)算

（1） 按蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol  氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T=1333×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/g 鮮重）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=1333×ΔA÷W

2、血清（漿）GOD 活力的計(jì)算

單位的定義：每 mL 血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol  氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mL）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷T÷V 樣本=1333×ΔA

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；V 提取，加入提取液體積， 1mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；d：光徑，1cm；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺消光系數(shù)，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、動(dòng)物組織 GOD 活力的計(jì)算

（1） 按蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol  氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T=2222×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol 氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/g 鮮重）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=2222×ΔA÷W

2、血清（漿）GOD 活力的計(jì)算

單位的定義：每 mL 血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol  氧化型鄰聯(lián)茴香胺定義為一個(gè)酶活力單位。

GOD（U/mL）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷T÷V 樣本=2222×ΔA

V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL； W：樣本鮮重，g；d：光徑，0.6cm；ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺消光系數(shù)，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。

注意事項(xiàng)：

1、不同勻漿組織中 GOD 活力不一樣，做正式試驗(yàn)之前請(qǐng)做 1-2 只預(yù)試，若 A2-A1>1, 則說(shuō)明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當(dāng)濃度勻漿上清液，使 A2-A1<1，以提高檢測(cè)靈敏度。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中若出現(xiàn) A1> A2 現(xiàn)象請(qǐng)將樣本用提取液稀釋成適當(dāng)濃度.

2、最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3、此試劑盒僅適用于動(dòng)物組織和動(dòng)物血清（漿）。