組織無機(jī)磷含量測試盒
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產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×2 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 5mL 蒸餾水，充分溶解后加入 2.5ml 試劑二，混勻。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，1mmol/L 無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
無機(jī)磷主要指磷酸根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等，此外促進(jìn)碳水化合物的合成、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)運。
鉬藍(lán)與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質(zhì)，通過測定 660nm 光吸收，即可計算無機(jī)磷含量。
自備儀器和用品：
離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水。
操作步驟：
一、無機(jī)磷提取：
取約 0.1g 組織，加試劑一 1mL 冰上充分勻漿，4℃，10000rpm，離心 10min，取上清液，待測。二、測定：
1. 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。2.打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。
3.測定：
試劑名稱（μL） | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
標(biāo)準(zhǔn)液 | 10 | ||
上清液 | 10 | ||
蒸餾水 | 100 | 90 | 90 |
試劑三 | 100 | 100 | 100 |
混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，分別記為 A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測定管。
注意：需在 40min 內(nèi)完成比色。
三、組織無機(jī)磷含量計算：
組織無機(jī)磷含量(mmol/g 樣本鮮重)= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷W=0.001×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)液：1mmol/L；V 總：上清液總體積，1mL=0.001 L；W：樣品質(zhì)量，g。
注意事項：
1、試劑三需臨用前配制，限當(dāng)天使用。
2、測定前先用 1~2 個樣品做預(yù)實驗，如吸光值大于 1，需用蒸餾水做相應(yīng)稀釋。
