淀粉磷酸化酶（Starch phosphorylase，SP）試劑盒說明書

規(guī)格：100管/96樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代謝過程唯一的可逆反應酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。

在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于質(zhì)體中，負責延長淀粉的 α-1,4- 葡萄糖鏈的非還原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于細胞質(zhì)基質(zhì)中，催化淀粉中的 α-1,4-糖苷鍵磷酸解產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸，負責葡萄糖鏈的磷酸解，是淀粉代謝過程中的關(guān)鍵酶。

在植物體中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個數(shù)量級，一般認為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測定意義。

測定原理：

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的 α-1,4-糖苷鍵與無機磷反應產(chǎn)生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產(chǎn)生葡萄糖-6-磷酸，并在 6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原NADP+產(chǎn)生 NADPH，使 340nm 下吸光值增加。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 3mL 水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存； 試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 3mL 水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存。樣本的前處理：

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清待測。

2、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議

500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

測定步驟：

1、 分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零；

2、 工作液的配制：臨用前將試劑一、試劑二、試劑三按照每個樣本 850μL:50μL:50μL 的比例混合，臨用前配制，半小時內(nèi)使用。

3、 在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 樣本和 950μL 工作液，立即混勻，記錄 340nm 處 1min

時的吸光值 A1 和 6min 時的吸光值A2，計算 ΔA=A2-A1。