土壤植酸酶（phytase）試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。測(cè)定意義

微量法 100T/48S

植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類(lèi)水解為肌醇與磷酸（鹽）的一類(lèi)酶的總稱(chēng)，屬磷酸單酯水解酶，它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷，降低糞便中的磷含量，減輕對(duì)環(huán)境的污染，改善營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和利用，因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理

植酸酶在一定溫度和 pH 值條件下，水解底物植酸鈉生成無(wú)機(jī)磷與肌醇衍生物，無(wú)機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物，在 700nm 處有特征吸收峰，根據(jù) 700nm 處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96 孔板、恒溫水浴鍋，甲苯（不允許快遞）。

試劑的組成和配制

緩沖液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加緩沖液 30mL 配制，現(xiàn)用現(xiàn)配；用不完的試劑

4℃保存一個(gè)月。

試劑二：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

顯色劑：粉劑×6 管，4℃避光保存，臨用前根據(jù)用量每瓶加 0.4mL 雙蒸水溶解，再加 1.6mL

試劑二混勻。

樣本處理

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過(guò) 30~50 目篩。

測(cè)定操作表

酶活性計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y = 0.8795x + 0.0084，R2 = 0.9977；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y 為吸光值△A。酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每克土樣每小時(shí)從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性（μmol/d /g 土樣）=（△A-0.0084）÷0.8795×V 反總÷W÷T

=19.68×（△A-0.0084）

V 反總：反應(yīng)總體積，0.52mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1d；W：樣本質(zhì)量，0.03g。

注意事項(xiàng)

1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制，每一瓶是 10 個(gè)樣本的用量，新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過(guò)期，應(yīng)放棄使用。

2、ΔA 線(xiàn)性范圍為 0.01-0.5。