中性、堿性土壤速效磷測試盒（微量法）   

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

貨號：4075

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 125mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 5mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 5mL 雙蒸水，溶解后 4℃保存一周。試劑三：液體 5mL×1 瓶，室溫保存。

標準品：10μmol/mL 標準磷貯備液 1mL×1 支，4℃保存。工作液：35mL 棕色空瓶×1 瓶。

微量法

工作液（定磷劑）的配制：按 H₂O：試劑一：試劑二：試劑三=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液應(yīng)為淺黃色。若變色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

產(chǎn)品說明：

速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態(tài)磷、一部分微溶性的無機磷和易礦化的有機磷等，土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一。

用弱堿法提取酸溶性磷和吸附態(tài)磷，鉬藍與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質(zhì)，通過測定

660nm 光吸收，即可計算磷含量。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計/酶標儀、天平、臺式離心機、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、20 目篩、漩渦震蕩儀、EP 管、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過 20 目篩，按照土壤質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：10-20 的比例（建議稱取約 0.05g 土樣，加入 1mL 提取液），振蕩提取 1h，10000g，25℃離心 10min，取上清液待測。  二、測定步驟：

1、 分光光度計/酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 660nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 將 10μmol/mL 標準液用提取液稀釋為 6、4、2、1、0.5、0.25μmol/mL 的標準溶液備用。

3、 操作表：(在 1.5mL 離心管中或 96 孔板依次加入下列試劑)

三、速效磷含量計算：

1、 標準曲線的繪制：

以各個標準溶液的濃度為 x 軸，其對應(yīng)的△A 標準為 y 軸，繪制標準曲線，得到標準方程 y=kx+b， 將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）

2、 速效磷含量的計算：

速效磷含量（μmol /g 鮮重）=x×V 樣÷（V 樣×W÷V 樣總）=x÷W。

V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g。

注意事項：

1、 工作液（定磷劑）應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，正常顏色為淺黃色，如有變色或變藍則均為失效。

2、 此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管或 EP 管等試驗器材均要求嚴格無磷。

3、 顯色結(jié)束后應(yīng)立即檢測。

4、 當△A 大于 1 時，建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定。

5、 用 96 孔板檢測時，注意板孔中的液體有無氣泡，如有氣泡應(yīng)排除氣泡后再測定 OD 值。