土壤脲酶（S-UE）活性檢測試劑盒說明書

 注意：正式測定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。微量法

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：甲苯2mL×1 瓶，4℃保存；（自備）

試劑二：粉劑×1 瓶，臨用前加入9mL 蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑4℃保存；

試劑三：液體19mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四A 液：液體0.4mL×1  支，4℃保存；

試劑四B 液：液體1.6mL×1  瓶，4℃保存；臨用前將A 液倒入B 液中混合，待用；用不完的試劑4℃保存一周；

試劑五：液體 2mL×1  瓶，4℃保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，1mg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

S-UE能夠水解尿素，產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機物質(zhì)含量、

全氮和速效氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。利用靛酚藍(lán)比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH₃-N。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰、甲苯

（不允許快遞）和蒸餾水。

操作步驟：

a. 培養(yǎng)

b. 將培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋10 倍（取0.1mL 上清液，加入0.9mL 蒸餾水）。若最終計算得到的

ΔA仍大于0.5繼續(xù)稀釋。

c. 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋至10、8、6、4、2、1、0.5、0μg/mL。

d. 測氨量（在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列試劑）

混勻，于 630nm 處，蒸餾水調(diào)零，讀吸光值 A，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（y）和吸光度（x,減去濃度為 0 的空白管），做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

脲酶活力計算

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA帶入公式（x）計算測定中樣品的濃度（μg/mL）y值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μgNH₃-N定義為一個酶活力單位。

脲酶活力（U/g 土樣）＝y×10×V反總÷W÷T=60×y

10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時間，1d；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。