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植物花葉病毒(TMV)

植物花葉病毒(TMV)

  • 產(chǎn)品貨號(hào):RF13010
  • 產(chǎn)品規(guī)格:48T
    保存溫度:2-8℃
  • 商品瀏覽量:
  • 優(yōu)惠價(jià):¥1300
  • 市場(chǎng)價(jià):¥1680
  • 快速詢價(jià):021-51172858

商品描述

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

植物(Plant)花葉病毒(TMV

ELISA檢測(cè)試劑盒

使用說(shuō)明書

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被花葉病毒(TMV)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中花葉病毒(TMV的存在與否。

樣品收集、處理及保存方法

1.  樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因?yàn)?/span>疊氮鈉(NaN3)是辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2.  標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。

3.  植物萃取液或其它相關(guān)樣本:請(qǐng)1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)。

4.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

  1. 酶標(biāo)儀(450nm)

  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  3. 37℃恒溫箱

    操作注意事項(xiàng)

  4.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

  5.   實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

  6.   預(yù)處理后的樣本請(qǐng)按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的最佳檢測(cè)效果。

  7. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

  8. 所有液體組分使用前充分搖勻。

    試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

無(wú)

陰性對(duì)照

0.5mL

0.5mL

無(wú)

陽(yáng)性對(duì)照

0.5mL

0.5mL

無(wú)

檢測(cè)抗原-HRP

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋

樣本稀釋液

6mL

3mL

無(wú)

底物A

6mL

3mL

無(wú)

底物B

6mL

3mL

無(wú)

終止液

6mL

3mL

無(wú)

封板膜

2張

2張

無(wú)

說(shuō)明書

1份

1份

無(wú)

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

無(wú)

 

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

  1.   手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

  2.   自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

    操作步驟

  3.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  4.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

  5.   樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

  6.   除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  7.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

  8.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  9.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

    結(jié)果判斷

     1.  試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00;

                    陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。

    2.  臨界值(Cut off)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

    3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

    4.  陽(yáng)性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽(yáng)性

    試劑盒性能

  10.  準(zhǔn)確性:陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00;陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果有效。

  11.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

  12.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

  13.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

  14. 有效期:6個(gè)月

    免責(zé)聲明

  15.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。

  16.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作,實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作,后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。



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