BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據(jù)目前世界上最常用的兩種蛋白濃度檢測(cè) 方法之一 BCA 法研制而成，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單， 高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。
產(chǎn)品特性：
1、靈敏度高：檢測(cè)濃度下限 25μg/ml，最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到 0.5μg，待測(cè)樣體積為 1-20 μ l；
2、在 50-2000μg/ml 濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。
3、BCA 法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá) 5%的 SDS， 5%的 Triton X-100 ，5%的 Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保 EDTA 低于 10mM，無(wú) EGTA，二硫蘇糖醇低于 1mM，β-巰基乙醇低于 0.01%。
4、不適用 BCA 法時(shí)建議試用優(yōu)選生產(chǎn)的 Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 包裝
P0012-3 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(50mg/ml BSA) 1ml
說(shuō)明書 1 份
保存條件：
BCA 試劑 A 和 B 室溫保存，蛋白標(biāo)準(zhǔn)請(qǐng)-20℃凍存。本試劑盒自訂購(gòu)之日起一年內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
需酶標(biāo)儀一臺(tái)，測(cè)定波長(zhǎng)為 540-595nm 之間，562nm 最佳。需 96 孔板。如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也 可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但測(cè)定時(shí)，需根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，適當(dāng)加大 BCA 工作液 的用量使不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量可相應(yīng)按比例放大也可不變。
使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。
為了加快 BCA 法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱，但是切勿過(guò)熱。
EDTA 濃度必須小于 10mM，不兼容 EGTA。
不適用 BCA 法時(shí)，請(qǐng)?jiān)囉?/span> Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
1. 根據(jù)樣品數(shù)量，按 50 體積 BCA 試劑 A 加 1 體積 BCA 試劑 B(50:1)配制適量 BCA 工作液，充 分混勻。BCA 工作液室溫 24 小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2. 完全溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品，取 10 μl 稀釋至 100μl，使終濃度為5mg/ml。蛋白樣品在什么溶 液中，標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)， 也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
3. 將標(biāo)準(zhǔn)品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 μl 加到 96 孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔中， 加用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的溶液 補(bǔ)足到 20 μl。
4. 加適當(dāng)體積樣品到 96 孔板的樣品孔中，加用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的溶液到 20 μl。
5. 各孔加入 200 μl BCA 工作液，37℃放置 30 分鐘。
注: 也可以室溫放置 2 小時(shí)，或 60℃放置 30 分鐘。BCA 法測(cè)定蛋白濃度時(shí)，吸光度會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷 加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
6. 測(cè)定 A562 ，540-595nm 之間的波長(zhǎng)也可接受。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度
常見(jiàn)問(wèn)題：
1. 測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色沒(méi)有明顯變化。 可能的原因是樣品中含有嚴(yán)重干擾 BCA 法測(cè)定蛋白濃度的物質(zhì)。
2. 是否每次測(cè)定時(shí)都需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？
建議每次測(cè)定時(shí)都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。因?yàn)?/span> BCA 法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并 且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時(shí)間和溫度，否則如需精確測(cè) 定宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
使用本產(chǎn)品的文獻(xiàn)：
1. Mitochondrial dysfunction as an early event in the process of apoptosis induced by woodfordin I in human leukemia K562 cells. Liu MJ, Wang Z, Li HX, Wu RC, Liu YZ, Wu QY. Toxicol Appl Pharmacol.
2004 Jan 15;194(2):141-55.
2.Dual effects of cycloheximide on U937 apoptosis induced by its combination with VP-16. Wu RC, Chen DF, Liu MJ, Wang Z. Biol Pharm Bull. 2004 Jul;27(7):1075-80.
3. A protein delivery system: biodegradable alginate-chitosan-poly(lactic-co-glycolic acid) composite microspheres. Zheng CH, Gao JQ, Zhang YP, Liang WQ.Biochem Biophys Res Commun. 2004 Oct 29;323(4):1321-7.
4. β2-integrins mediate a novel form ofchemoresistance in cycloheximide-induced U937 apoptosis. R.-C. Wu, Z. Wang, M.-J. Liu, D.-F. Chen and X.-S. Yue.Cell. Mol. Life Sci. 2004,61(16):2071–2082.
