土壤β-1 ,4-葡萄糖苷酶 (β-G) ELSAELISA試劑盒
快速詢價(jià)：021-51172858
本試劑盒只能用于科學(xué)研究, 不得用于醫(yī)學(xué)診斷
土壤 (soil) β-1 ,4-葡萄糖苷酶 (β-G) EL
SA檢測(cè)試劑 盒
使用說(shuō)明書
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往 預(yù)先包被β-1,4-葡萄糖苷酶 (β-G） 抗體的包被微孔中 ，依次加入標(biāo) 本 、標(biāo)準(zhǔn)品 、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體 ，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌 。用底物 TMB顯色 ，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色 ，并在酸的作用 下轉(zhuǎn)化成最終的黃色 。顏色的深淺和樣品中的β-1,4-葡萄糖苷酶 (β -G）呈正相關(guān) 。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì) 算樣品活性 。
樣品收集 、處理及保存方法
1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3）， 因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過(guò)氧 化物酶（HRP） 的抑制劑 。
2. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取 ，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行 。
3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請(qǐng)1000 x g離心20分鐘，取上清即 可檢測(cè) 。
4. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于
-20℃ , 避免反復(fù)凍融 ，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍 。
自備物品
1. 酶標(biāo)儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL 、2-20uL 、20-200uL 、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
操作注意事項(xiàng)
1. 試劑盒保存在 2-8℃ , 使用前室溫平衡 20 分鐘 。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶 ，這屬于正常現(xiàn)象 ，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解 后再使用 。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存 。
3. 濃度為 0 的 S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明 書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5 倍 ，最終結(jié)果乘以 5 才是樣本實(shí)際濃度 。
4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間 、加液量及順序進(jìn)行溫育操作 。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻 。
試劑盒組成
名稱 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無(wú) |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6 管 | 0.3mL*6 管 | 無(wú) |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
檢測(cè)抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無(wú) |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
底物 B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無(wú) |
說(shuō)明書 | 1 份 | 1 份 | 無(wú) |
自封袋 | 1 個(gè) | 1 個(gè) | 無(wú) |
注 ：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為 ：0 、2.5 、5 、10 、20 、40 U/mL
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋 ：蒸餾水按 1： 20 稀釋， 即 1 份的 20×洗滌 緩沖液加 19 份的蒸餾水 。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體 ，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡
孔內(nèi)液體 ，在吸水紙上拍干 ，如此洗板 5 次 。
2. 自動(dòng)洗板機(jī) ：每孔注入洗液 350μL ，浸泡 1min ，洗板 5 次 。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min后的鋁箔袋中取出所需板條 ，剩余板條用自 封袋密封放回 4℃ 。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL； 3. 樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；空白孔不加 。 4. 除空白孔外 ，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶 （HRP） 標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL， 用封板膜封住反應(yīng)孔， 37℃水浴 鍋或恒溫箱溫育 60min 。
5. 棄去液體， 吸水紙上拍干 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置 1min ，甩去 洗滌液， 吸水紙上拍干 ，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物 A 、B 各 50μL ，37℃避光孵育 15min 。
7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值 。
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性 ：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值， 大于等于 0.9900 。
2. 靈敏度 ：最低檢測(cè)濃度小于 1.0 U/mL 。
3. 特異性： 不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng) 。
4. 重復(fù)性 ：板內(nèi) 、板間變異系數(shù)均小于 15% 。
5. 貯藏 ：2-8℃ , 避光防潮保存 。
6. 有效期： 6 個(gè)月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用， 不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)， 否則所 產(chǎn)生的一切后果， 由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān) ，本公司概不負(fù)責(zé) 。
2. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作， 實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作 ，后果由實(shí)驗(yàn)者 承擔(dān) 。
格按照說(shuō)明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者 承擔(dān)。
