ELISA試劑盒檢測(cè)的目的是為實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確可靠定量分析實(shí)驗(yàn)的依據(jù)。它的每一步都需要大家謹(jǐn)慎小心,在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本及時(shí)儲(chǔ)存在4℃冷藏箱中備用。對(duì)于隔天再檢測(cè)的樣本及時(shí)分裝后凍存在-20℃冷藏箱中備用,有條件的zui好是在-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。同時(shí)為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須堅(jiān)持全面質(zhì)量控制和全過(guò)程質(zhì)量控制。
我們實(shí)驗(yàn)中的常規(guī)標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、組織、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1.血清樣本
分離管分離血清。在1000g離心之前,使血樣凝集30分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測(cè),或者分裝,-20℃貯存。避免反復(fù)凍融。
2.血漿樣本
EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。在血樣收集30分鐘內(nèi)離心收集樣本。即刻檢測(cè),或者分裝,-20℃貯存。避免反復(fù)凍融。
注意:不要使用嚴(yán)重溶血或高血脂的樣本。所有樣本收集后,應(yīng)及時(shí)分裝并貯存于-20℃。如果在24小時(shí)內(nèi)檢測(cè),樣本可以存放在2-8℃。避免樣本的反復(fù)凍融。在分析前,冷凍樣本應(yīng)該緩慢的恢復(fù)至室溫,輕柔地混勻。檢測(cè)前,樣本中可見(jiàn)的沉淀必須去除。
3.尿液樣本
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4.組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
5.細(xì)胞培養(yǎng)上清
細(xì)胞培養(yǎng)液在2500rpm/min離心20分鐘后,收集上清即刻檢測(cè),或者分裝,-20℃貯存。避免反復(fù)凍融。